Методика испытания на подлинность препарата «Масло облепиховое» (Россия) согласно ФС и хроматограммы

Подлинность. 0,03-0,04 мл препарата помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 1 мл метилового спирта, 3 капли ацетилхло­рида и нагревают с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 1 ч. Избыток метилового спирта отгоняют. В реакционную смесь прибавляют 0,2 мл гексана и перемешивают. Отбирают 0,5-1,0 мкл смеси с помощью микрошприца и вводят в газожидкостный хроматограф с детектором по ионизации в пламени при следующих условиях: температура колонки – 1800С, температура испарителя – 2500С, скорость газа-носителя гелия – 30 мл/мин, скорость протяжки ленты 0,15 см/мин, колонка стеклянная длиной 2,4 м, неподвижная фаза – 15% полиэтиленгликосукцинат на хроматоне N-AW-ТDMCS (0,16-0,25 мм), или (0,250-0,315 мм) (рис.35).

Метиловые эфиры жирных кислот облепихового масла: 1. миристиновой кислоты; 2. пальмитиновой кислоты; 3. пальмитолеиновой кислоты; 4. стеариновой кислоты; 5. олеиновой кислоты; 6. линолевой кислоты; 7. линоленовой кислоты.
Последовательность выхода пиков на хроматограмме: 1 – метил миристинат; 2 – метилпальмитат; 3 – метиловый эфир пальмитолеиновой кислоты; 4 – метилстеарат; 5 – метилолеинат; 6 – метиловый эфир

линолевой кислоты; 7– метиллиноленат.

Рис. 35. Газожидкостная хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот облепихового масла

Приложение 3

Методика идентификации и количественного анализа эналаприла малеата в препарате «Энап» ( лекарственная форма-таблетки по10 и 20 мг эналаприла малеата) и хроматограммы

НОРМА: 95.0 %-105,0 % от заявленного количества

Метод: Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ),

метод внешнего стандарта.

Оборудование: Жидкостной хроматограф с переменным УФ-детектором

и колонкой c термостатом.

Стандарты:

Эналаприл малеат: основной рабочий стандарт.

Растворители и реагенты:

1. Вода очищенная, для ВЭЖХ.

2. Ацетонитрил, СНзСN R1(Европ. фармакопея, для ВЭЖХ)

3. Калия дигидрофосфат, КН2Р04: для ВЭЖХ.

4. Фосфорная кислота НЗР04; не менее 85%, ч.д.а.

5. Фосфатный буфер с рН 2,0: 136 мг КН2Р04 перенести в мерную колбу вместимостью 1 л, растворить в 800 мл воды, довести рН раствора до 2,0 фосфорной кислотой и разбавить водой до метки. Перемешать и отфильтровать полученный раствор через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

6. Растворитель: фосфатный буфер с рН 2,0

Хроматографические условия:



Колонка: Нуреrsil BDS С-18, частицы 3 мкм, 100 мм х 4 мм, с предколонкой для обращенной фазы.

Температура колонки: 70°С

Подвижная фаза: фосфатный буфер с рН 2,0 : ацетонитрил 17:8 (V/V).

Перед использованием фильтруют подвижную фазу через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют ее (с помощью ультразвука или гелия).

Скорость: около 1,5 мл/мин

Обнаружение: УФ, длина волны 215 нм.

Растворы для ВЭЖХ измерений

Стандартный раствор (SS)

Точно взвешивают 10 мг стандарта эналаприла малеата в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в растворителе и доводят растворителем до метки ( 0.2 мг эналаприла малеата/мл).

Испытуемый раствор (SaS)

Взвешивают 20 таблеток и определяют среднюю массу таблетки. Соответствующее количество целых таблеток (см. таблицу) помещают в подходящую мерную колбу, прибавляют 400 мл растворителя и воздействуют ультразвуком до полной распадаемости таблеток (в течение около 20 мин). Охлаждают до комнатной температуры, доводят растворителем до метки и хорошо перемешивают.

Центрифугируют часть суспензии при 3000 об/мин в течение 10 мин. Прозрачный центрифугат является испытуемым раствором (SaS). При необходимости фильтруют центрифугат через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм (SaS: 0,2 мг эналаприла малеата/мл).

Анализ

После проверки пригодности хроматографической системы выполняют калибровку для эналаприла малеата, используя метод внешнего стандарта. Затем вводят 10 мкл испытуемого раствора (SaS). Записывают хроматограмму и отмечают характеристики (время удерживания и площадь пика) эналаприла.

Идентификация

Время удерживания пика эналаприла на хроматограмме испытуемого раствора (SaS), полученной при количественном определении методом ВЭЖХ, соответствует времени удерживания пика эналаприла на хроматограмме стандартного раствора (SS), полученной в тех же условиях.



Содержание эналаприла малеата

Вычисляют содержание эналаприла малеата в % относительно заявленного количества.

Вычисление

Css · ASaS · a.m. · V

% эналаприла малеата = · 100

Ass · WSa · SA

ASaS – площадь пика эналаприла на хроматограмме испытуемого р-ра (SaS)

Ass – среднее значение площади пика эналаприла на хроматограмме стандартного раствора (SS)

Сss – концентрация эналаприла малеата в стандартном р-ре (SS), в мг/мл

V – объем мерной колбы, в мл

WSa – масса соответствующего количества целых таблеток, используемых для приготовления испытуемого раствора (SaS), в мг

SА – заявленное количество эналаприла малеата в одной таблетке, в мг

а.m. – средняя масса таблетки, в мг

100 – коэффициент пересчета, в %.

Дата: 04.07.2009 12:10:26

Хроматограмма: Эналаприл

ПРОБА: Энап 20мг 6208; - количественное определение

Пробирка: 3 Объем: 5,0 мкл Разведение: 1,00

КОЛОНКА: Nucleosil 100 – 5C18

Размер: 2,0 х 75 мм. Зернение: 5,0 мкм

Подвижная фаза (А): фосфатный буфер с рН 2,0 : ацетонитрил (68:32) Скорость подачи: 100 мкл/мин

Температура: 60,0 0С

Давление: 3,99 кПа


Стандарт: Канал: 214 нм

Нормализация: 100,00

№ Удерж. Высота Площадь 210 нм 254 нм 280 нм Название

1 188,28 0,83 26,762 1,080 0,050 0,015 малеиновая к-та

2 387,75 0,49 21,380 1,305 0,016 0,001 эналаприл

____________________________

597,82 1,32 48,142

Дата: 04.07.2009 12:10:41

Хроматограмма: Эналаприл

ПРОБА: Эналаприл СО 0,20 мг/мл

Пробирка: 2

Разведение: 1,00

КОЛОНКА: Nucleosil 100 – 5C18

Размер: 2,0 х 75 мм

Зерно: 5,0 мкм

ПОДВ. ФАЗА (А): фосфатный буфер с рН 2,0 : ацетонитрил (68:32) Скорость подачи: 100 мкл/мин

Температура: 60,0 0С. Давление: 3,99 кПа

Стандарт: Канал: 214 нм

Нормализация: 100,00

№ Удерж. Высота Площадь 210 нм 254 нм 280 нм Название

1 190,20 0,77 25,025 1,071 0,052 0,014 малеиновая к-та

2 402,12 0,47 20,521 1,293 0,014 0,006 эналаприл

____________________________

597,92 1,25 45,545

РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА

Основная

1. Беликов В.Г. Фармацевтическая химия. В 2 ч.: Учебн. пособие.- 5-е изд., перераб. и доп. – М.: МЕДпресс-информ, 2008. – 615 с.

2. Харитонов Ю.Я. Аналитическая химия (аналитика). В 2-х кн. Кн.2. Количественный анализ. Физико-химические (инструментальные) методы анализа. 3-е изд. – М.: Высш. шк., 2005. – 559 с.

Дополнительная

1. Государственная фармакопея XII РФ. – М.: Медицина, 2007. – 696 с.

2. Пентин Ю.А., Курамшина Г.М. Основы молекулярной спектроскопии. – М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2008.- 398 с.

3. Преч Э., Бюльман Ф., Афолькер К. Определение строения органических соединений.- М.: Мир, 2006.- 439 с.

4. Электроаналитические методы. Теория и практика. Под ред. Ф. Штольца. – М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2006.- 326 с.


Учебное издание


7815036383139493.html
7815100679219958.html
    PR.RU™